廣東省鉑藝轉(zhuǎn)印紙槽應(yīng)用具體步驟
鉑藝轉(zhuǎn)印紙槽可迅速、高品質(zhì)地轉(zhuǎn)印紙中小型疑膠。做為Mini-PROTEAN 3 電泳原理系統(tǒng)軟件的1個(gè)部件,鉑藝轉(zhuǎn)印紙槽能容下2 個(gè)疑膠支撐架轉(zhuǎn)印紙夾,用以在Mini-PROTEAN 3 電泳槽內(nèi)電轉(zhuǎn)印紙二種小疑膠(Mini-PROTEAN 3 疑膠和ReadyGel 預(yù)制構(gòu)件膠)。
鉑藝轉(zhuǎn)印紙槽特性包含:
1.1鐘頭內(nèi)轉(zhuǎn)印紙2 塊7.5 x 10 cm 疑膠;也可開展低強(qiáng) 度的留宿轉(zhuǎn)印紙
2.電極絲距離4cm,以造成強(qiáng)靜電場(chǎng)確保合理的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印紙
(圖為鉑藝手動(dòng)轉(zhuǎn)印槽產(chǎn)品之一)
3.色調(diào)標(biāo)識(shí)的轉(zhuǎn)印紙夾和電級(jí),保證轉(zhuǎn)印紙全過程中疑膠 的恰當(dāng)定項(xiàng)
4.內(nèi)嵌鉑藝水冷卻設(shè)備,迅速消化吸收遷移全過程中造成 的發(fā)熱量
5.既可做為詳細(xì)的單獨(dú)機(jī)器設(shè)備,又可做為1個(gè)控制模塊與 Mini-PROTEAN 3 轉(zhuǎn)印紙槽的緩沖液槽和蓋適配
鉑藝轉(zhuǎn)印紙槽應(yīng)用具體步驟:
全線請(qǐng)戴膠手套實(shí)際操作,以防環(huán)境污染鉑藝轉(zhuǎn)印紙槽!
1)電泳原理后SDS-PAGE 膠卷浸在轉(zhuǎn)印紙緩沖液中,洗2~3 次,每一次10min.
2)取下鉑藝
轉(zhuǎn)印槽,先當(dāng)心放一拌和子在底端,再倒一大半轉(zhuǎn)印紙緩沖液。
3)取轉(zhuǎn)印紙切割成約如膠卷尺寸,先往正方形培養(yǎng)皿中以少量乙醇淋濕數(shù)s,再嵌入鉑藝轉(zhuǎn)印紙槽中的緩沖液10 min 后應(yīng)用。 另取二張過濾紙,及其兩塊正方形海綿墊,都放到伯樂轉(zhuǎn)印紙槽的緩沖液中預(yù)留。
4)取下轉(zhuǎn)印紙夾開啟放置,先墊一張正方形海棉墊,鋪平一張濕過濾紙,當(dāng)心鋪平SDS-PAGE膠上來,隨后當(dāng)心迭上已濕潤(rùn)的轉(zhuǎn)印紙,用涂菌玻璃棒逐出汽泡;轉(zhuǎn)印紙?jiān)俚紊蠑?shù)滴緩沖液后,蓋章一層層過濾紙,及另一張海棉,也都不能深陷汽泡,就能把全部轉(zhuǎn)印紙三文治卡夾裝上。
膠迭到轉(zhuǎn)印紙時(shí),最好是一回取得成功,不必重作,不然蛋白色帶將會(huì)會(huì)印上去,最終造成重迭影象。
5)將轉(zhuǎn)印紙三文治嵌入早已會(huì)有一大半轉(zhuǎn)印紙緩沖液的鉑藝轉(zhuǎn)印紙槽中,留意有轉(zhuǎn)印紙的那一邊向正級(jí)(鮮紅色),膠卷那朝向負(fù)級(jí)(灰黑色)。
6)當(dāng)三文治都放進(jìn)鉑藝轉(zhuǎn)印槽后,以轉(zhuǎn)印紙緩沖液蓋滿全部的三文治,當(dāng)心動(dòng)下卡夾,去除附在卡夾內(nèi)外的汽泡,蓋上外蓋,放進(jìn)一攪拌裝置上,開啟攪拌裝置剛開始拌和,另外接上開關(guān)電源,設(shè)備進(jìn)行后置放10 min.
7)以300mA剛開始轉(zhuǎn)印紙,溫度會(huì)逐漸升高,轉(zhuǎn)印紙1.5 h上下 后中斷轉(zhuǎn)印紙,取下轉(zhuǎn)印紙三文治,開啟后先后取下轉(zhuǎn)印紙及膠。
實(shí)際轉(zhuǎn)印紙標(biāo)準(zhǔn)要依據(jù)蛋白質(zhì)的尺寸開展提升,留意超低溫。
8)轉(zhuǎn)印紙后的膠卷能夠再次開展染色劑,看有沒有蛋白殘余。若電泳原理時(shí)加上深藍(lán)色規(guī)范蛋白marker(SeeBlue),則可在轉(zhuǎn)印紙上見到深藍(lán)色的色帶,明確轉(zhuǎn)印紙取得成功,并可評(píng)定轉(zhuǎn)印紙高效率。
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